Leishmania – PCR Quantitativa
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O diagnóstico molecular das leishmanioses baseia-se na detecção do material genético do parasita em amostras clínicas de animais infectados. A PCR permite a identificação do parasita com o uso de sondas específicas, através de amplificação do cinetoplasto da Leisnhmania sp, podendo ser utilizada no diagnóstico da leishmaniose tegumentar e visceral. A técnica de PCR Real Time (qPCR) permite a detecção e quantificação da Leishmania.
A abordagem quantitativa pode ser útil no monitoramento da carga parasitaria em amostras biológicas (médula e linfonodo) de cães. O controle de qualidade é realizado pelo uso indispensáve, em cada rotina, de controle negativos, controles positivos e controle internos. O controle interno funciona como controle da extração e da PCR, certificando que os resultados negativos sçao realmente negativos e que não se devem a inibição do PCR, má qualidade da extração e / ou problemas com algum reagente empregado.
O laboratório que oferece o teste de quantificação da carga parasitária de Leishmania em cães deve ter uma estrutura fisíca particularizada, que cumpra requisitos afim de se evitar contaminação e resultados falso-positivos. Estes cuidados são indispensáveis na prevenção de contaminação de amostras clínicas com fragmento de material genético de outras amostras ou amplificado durante o PCR.
Método
PCR Real Time – Quantificação absoluta Leishmania sp, por TAQMAN MGB.
Condições
Aspirado de médula ósseo em EDTA ou aspirado de linfonodos em 200 microlitros de solução fisiológica estéril.
Instruções
Aspirado de linfonodo: diluir as amostras sempre em 200 microlitros de soro fisiológico estéril.
Amostras de médula: é indispensável o uso de EDTA, na proporção 1:5 (1 parte de EDTA: 5 partes de sangue).
Todas as amostras devem ser coletadas em frasco estéril.
Não serão aceitas amostras em seringas.
Enviar as amostras refrigeradas em até 24 horas.
A confiabilidade, especificidade e sensibilidade do teste dependem do cumprimento de todas estas recomendações.
Interferentes
Não proceder a qualquer uma das instruções de coleta ou amostras conservadas em Heparina.
Volume recomendável
Volume recomendável 1 ml (todo material aspirado).
Volume mínimo
Volume mínimo: 200 microlitros (todo material aspirado).
Conservação para envio
Enviar as amostras refrigeradas entre 2° a 8° C em até 24 horas.
Nota: Amostras coaguladas; Amostras diluídas sem ser em soro fisiológico estéril; Amostras de médula em seringa e/ou sem EDTA NÃO serão processadas.
